生物化学试验有哪些分类

生物化学试验有哪些分类

单糖 四碳糖:赤藓糖 ,五碳糖:核糖 核酮糖木糖 阿拉伯糖 六碳糖: 葡萄糖果糖 半乳糖 甘露糖

双糖 蔗糖(葡萄糖+果糖) 乳糖(葡萄糖+半乳糖) 麦芽糖(两分子葡萄糖)

三糖 棉子糖(葡萄糖+果糖+半乳糖)

多糖 菊糖(多分子果糖) 淀粉

醇类 侧金盏花醇 卫茅醇 甘露醇 山梨醇

非糖类 肌醇

2.葡萄糖代谢类型鉴别试验

(1)原理:细菌在分解葡萄糖的过程中,必须有分子氧参加的,称为氧化型;能进行无氧降解的为发酵型; 不分解葡萄糖的细菌为产碱型。 发酵型细菌无论在有氧或无氧环境中都能分解葡萄糖,而氧化型细菌在无氧环境中则不能分解葡萄糖。本试验又称氧化发酵( O/F或 Hugh-Leifson,HL)试验,可用于区别细菌的代谢类型。

(2)方法:挑取少许纯培养物(不要从选择性平板中挑取) 接种 2支 HL 培养管中,在其中一管加入高度至少为0.5cm 的无菌液体石蜡以隔绝空气(作为密封管),另一管不加(作为开放管)。置35℃孵箱孵育 48h 以上。。

(3)结果:两管培养基均不产酸(颜色不变)为阴性;两管都产酸(变黄)为发酵型;加液体石蜡管不产酸,不加液体石蜡管产酸为氧化型

3.甲基红(MR)试验

(1)原理:某些细菌在糖代谢过程中,分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸进一步被分解为甲酸、乙酸和琥珀酸等,使培养基 pH 下降至 4.5 以下时,加入甲基红指示剂呈红色。如细菌分解葡萄糖产酸量少,或产生的酸进一步转化为其它物质(如醇、醛、酮、气体和水),培养基 pH 在 5.4 以上,加入甲基红指示剂呈桔黄色

(2)方法:将待试菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中, 35℃孵育 48h~96h后,于 5ml 培养基中滴加5~6 滴甲基红指示剂,立即观察结果

(3)结果判定:呈现红色者为阳性,桔黄色为阴性,桔红色为弱阳性。

(4)应用:常用于肠杆菌科内某些种属的鉴别,如大肠埃希菌和产气肠杆菌,前者为阳性,后者为阴性。肠杆菌属和哈夫尼亚菌属为阴性,而沙门菌属、 志贺菌属、枸橼酸杆菌属和变形杆菌属等为阳性。

4.B-半乳糖苷酶试验(ONPG 试验)

(1)原理:乳糖发酵过程中需要乳糖通透酶和β-半乳糖苷酶才能快速分解。不有些细菌只有半乳糖苷酶,因而只能迟缓发酵乳糖, 所有乳糖快速发酵和迟缓发酵的细菌均可快速水解邻硝基酚 -B-D-半乳糖苷(O-nitropheny- β-D-galactopyranoside,ONPG )而生成黄色的邻硝基酚。用于枸梅酸菌属、亚利桑那菌属与沙门菌属的鉴别。

(2)方法:将待试菌接种于ONPG 肉汤中,35℃水浴或孵箱孵育18~24h,观察结果。

(3)结果:呈现亮黄色为阳性,无色为阴性。

(4)应用:可用于迟缓发酵乳糖细菌的快速鉴定,本法对于迅速及迟缓分解乳糖的细菌均可短时间内呈现阳性。埃希菌属、枸缘酸杆菌属、克雷伯菌属、哈夫尼亚菌属、沙雷菌属和肠杆菌属等均为试验阳性,而沙门菌属、变形杆菌属和普罗威登斯菌属等为阴性。

5.VP 试验

(1)原理:测定细菌产生乙酰甲基甲醇的能力。某些细菌如产气肠杆菌,分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸进一步脱羧形成7酰甲基甲醇 在碱性条件下,乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰,进而与培养基中的精氨酸等含胍基的物质结合形成红色化合物。即 V-P 试验阳性

(2)方法:将待检菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中 35℃孵育 24~48h,加入 50g/L a 萘酚(95%乙醇溶液)0.6ml,轻轻振摇试管,然后加 0.2ml 400g/L KOH,轻轻振摇试管30s 至1min,然后静置观察结果

(3)结果:红色者为阳性,黄色或类似铜色为阳性。

(4)应用:主要用于大肠埃希菌和产气肠杆菌的鉴别。本试验常与 MR 试验一起使用,一般情况下,前者为阳性的细菌,后者常为阴性, 反之亦然。 但肠杆菌科细菌不一定都这样规律,如蜂房哈夫尼亚菌和奇异变形杆菌的 VP 试验和 MR 试验常同为阳性。

6,胆汁七叶苷水解试验

(1)原理:在10%~40%胆汁存在下,测定细菌水解七叶苷的能力。七叶苷被细菌分解生成的七叶素,十叶素与培养基中的枸橡酸铁的二价铁离子发生反应形成黑色化合物

(2)方法:将被检菌接种于胆汁七叶苷培养基中 35℃孵育 18~24h 后,观察结果。(3)结果:培养基完全变黑为阳性,不变黑为阴性。

(4)应用:主要用于鉴别D 群链球菌与其它链球菌的区别,以及肠杆菌科的某些种,某些厌氧菌(如脆弱拟杆菌等)的初步鉴别, D 群链球菌本试验为阳性。

7.淀粉水解试验

(1)原理:产生淀粉酶的细菌能将淀粉水解为糖类,在培养基上滴加础液时,可在菌落周围出现透明区。

(2)方法:将被检菌划线接种于淀粉琼脂平板或试管中 35℃孵育 18~24h,加入革兰碘液数滴,立即观察结果。

(3)结果:阳性反应,菌落周围有无色透明区,其它地方蓝色;阴性反应,培养基全部为蓝色。

(4)应用:用于白喉棒状杆菌生物型的分型,重型淀粉水解试验阳性,轻、中型阴性;芽胞杆菌属菌种和厌氧菌某些种的鉴定。8 甘油复红试验

(1)原理:甘油可被细菌分解生成丙酮酸,丙酮酸脱去羧基为乙醛,乙醛与无色的复红生成配式化合物,呈深紫红色。

(2)方法:取被检菌接种于甘油复红肉汤培养基中,于 35℃孵育,观察 2~8d。应同时做阴性 对照。

(3)结果:紫红色为阳性,与对照管颜色相同为阴性。

(4)应用:主要用于沙门菌属内各菌种间的鉴别。伤寒沙门菌、甲(丙)型副伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、孔道夫沙门菌和仙台沙门菌本试验为阴性, 乙型副伤寒沙门菌结果不定,其它不常见沙门菌多数为阳性。

9.葡萄糖酸氧化试验

(1)原理:某些细菌可氧化葡萄糖酸钾,生成 Q-酮基葡金糖酸。 a-酮基葡萄糖酸是一种还原性物质,可与班氏试剂起反应,出现棕色或砖红色的氧化亚铜沉淀

(2)方法:将待检菌接种于葡萄糖酸盐培养基中 (1ml),置35℃孵育 48h加入班氏试剂1ml 于水浴中煮沸10min 并迅速冷却,观察结果。

(3)结果:出现黄到砖红色沉淀为阳性,不变或仍为蓝色为阴性。

(4)应用:主要用于假单胞菌的鉴定和肠朴国科国分群。

二、氨基酸和蛋白质的代谢试验

1.硫化氢试验

(1)原理:某些细菌能分解含硫氨基酸生成硫化氢,与亚铁离子或铅离子结合形成黑色沉淀物。

(2)方法:将待检菌接种于含硫化物及亚铁离子的培养基或克氏双糖铁琼脂( KIA)中,35℃孵育 18~24h,观察有无黑色沉淀出现。或用醋酸铅纸条,悬挂于 KIA 管中(白色滤纸,根据试管大小裁剪适当,在热的 50g/L 醋酸铅饱和水溶液中浸泡,然后于50~60C烘干,121℃ 15min 高压灭菌备用)。醋酸铅是最敏感的方法。

(3)结果:有黑色沉淀物为阳性。

(4)应用:主要用于鉴别肠杆菌科细菌,如沙门菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属、爱德华菌属等为阳性,其它菌属大多为阴性。 但沙门菌属中亦有部分硫化氢阴性菌株,如甲型副伤 寒、仙台、猪霍乱沙门菌等。

2.明胶液化试验

(1)原理:细菌分泌的胞外蛋白水解酶(明胶酶)能分解明胶,使明胶失去凝固能力而液化。

(2)方法:将待检菌接种于明胶培养基中, 35℃孵育 24h 到 7d 或更长时间,每24h 取出放入

4℃冰箱约2h后,观察有无凝固。

(3)结果:如无凝周,则表示明胶已被解,液化试验阳性。如凝周,则继续培养

(3)应用:奇异变形杆菌、普通变形杆菌、沙雷菌属和阴沟肠杆菌等到能液化明胶,肠杆菌科中的其它细菌很少液化明胶。有些厌氧菌如产气英膜梭菌、脆弱类杆菌等也能液化明胶。返回搜狐,查看更多

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